經(jīng)驗(yàn)講談ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)問題分析方案
實(shí)驗(yàn)問題出現(xiàn)之后找到原因就會(huì)很容易解決，今天上海遠(yuǎn)慕生物您帶來了技術(shù)分享內(nèi)容。主要是相關(guān)ELISA實(shí)驗(yàn)的一些問題解決，下面一起來看經(jīng)驗(yàn)講談ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)問題分析方案：
*、陰性樣本的吸光度值低于陽性吸光度值原因：
可能原因是出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象或酶標(biāo)板孔中的試劑未充分的混合。解決的辦法是注意操作的方法，注意洗滌時(shí)的方法、加完試劑后可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30s，混勻液體。
第二、吸光度值偏高是怎么回事;
可能引起的原因有孵育的溫度過高、反應(yīng)的時(shí)間過長(zhǎng)。相對(duì)應(yīng)的解決辦法是調(diào)整孵育環(huán)境的溫度，如無法調(diào)整室內(nèi)的溫度，請(qǐng)將顯色時(shí)間適當(dāng)?shù)目s短、控制反應(yīng)時(shí)間。
第三、樣品的稀釋:
樣品稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗(yàn)的均一性。
ELISA反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國(guó)外檢測(cè)血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗(yàn)確定，以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴(yán)格按使用說明書操作，如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進(jìn)行稀釋，個(gè)別用戶取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確，檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)問題。
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