淀粉酶和蔗糖酶專一性的測定
點擊次數：4573 更新時間：2018-08-03
淀粉酶和蔗糖酶專一性的測定
一、目的和要求
1.了解酶的特異性。
2.掌握檢查酶的特異性的方法及其原理。
二、原理
酶是一種生物催化劑，它與一般催化劑主要的區別是酶具有高度的特異性(即專一性)。所謂特異性指的是一種酶只能對一種化合物或一類化合物(通常在這些化合物的結構中具有相同的化學健)起一定的催化作用，而不能對別的物質發生催化反應。例如：淀粉酶能催化淀粉水解，但不能催化脂肪水解。而脂肪酶則能催化脂肪水解，卻不能催化淀粉水解。
本實驗以唾液酶(合淀粉酶及少量麥芽糖酶)和蔗糖酶(蔗糖酶是一種水解酶，它能使蔗糖水解為果糖和葡萄糖)對淀粉和蔗糖的作用為例，說明酶的特異性。
三、試劑和器材
1、試劑
(1)2%蔗糖溶液：蔗糖是典型的非還原糖，若商品蔗糖中還原糖含量超過一定標準，則呈現還原性，這種蔗糖不能使用。所以，實驗前必須進行檢查。本實驗用的蔗糖至少應是分析純的試劑。
(2)0.3%氯化鈉的1%淀粉溶液(新鮮配制)
(3)稀釋200倍的新鮮唾液
(4)蔗糖酶溶液：取干酵母100克，置于乳缽內，添加適量蒸餾水及少量石英砂。用力凍融法研磨提取，然后加蒸餾水，使總體積約為500毫升，過濾。將濾液保存于冰箱內備用。
(5)本尼迪克特試劑：將硫酸銅17.3克溶解于100毫升熱蒸餾水中。冷卻后，稀釋至150毫升。取檸檬酸鈉173克及碳酸鈉(NaCO3.H2O)100克，加水600毫升，加熱使之溶解，冷后，稀釋至850毫升。后，把硫酸銅溶液緩緩傾入檸檬酸鈉-碳酸鈉溶液中?；靹蚝?，用細口瓶貯存。此試劑可保存很久。
2、器材
(1)試管及試管架 (2)試管夾
(3)玻璃漏斗 (4)量筒(100毫升)
(5)燒杯(100毫升) (6)錐形瓶(100毫升)
(7)吸量管(1、2、5、10毫升) (8)恒溫水浴
(9)電爐 (10)濾紙
四、操作步驟
1、淀粉酶的特異性實驗
取 2支試管，各加入本尼迪克特(Benedict)試劑 2毫升，再分別加入1%淀粉溶液或2%蔗糖溶液各4滴。混合均勻后，放在沸水浴中煮2—3分鐘。觀察有無紅黃色沉淀產生，純凈的淀粉和蔗糖不呈陽性反應。
再取3支試管，每管各加入稀釋200倍的新鮮唾液1毫升。再分別加水、1%淀粉溶液或2%蔗糖溶液各3毫升?；靹?，放入37℃恒溫水浴中保溫，15分鐘后取出。各加本尼迪克特試劑2 毫升，搖勻，放在沸水浴中煮2—3分鐘。觀察有無紅黃色沉淀產生。
應該指出，關于新鮮唾液的稀釋倍數，一般為200倍。但是，由于不同人或同一人不同時間采收的唾液內淀粉酶的活性并不相同，有時差別很大，稀釋倍數可以是50—300倍，甚至超出此范圍。因此，應事先確定稀釋倍數。另外，要注意除去唾液里的氣泡，避免稀釋倍數不準確而影響實驗結果。稀釋好的新鮮唾液用濾紙過濾后待用。
2、蔗糖酶的特異性實驗
取2支試管，各加入蔗糖酶溶液1毫升，再分別加入1%淀粉溶液3毫升或2%蔗糖溶液3毫升。搖勻，放入37℃恒溫水浴中保溫，10分鐘后取出，各加入本尼迪克特試劑2毫升，混勻后放入沸水浴中煮2—3分鐘。觀察有無紅黃色沉淀產生。
再取1支試管，加入蔗糖酶1毫升和蒸餾水3毫升，混勻，加人本尼迪克特試劑2毫升，搖勻，在沸水浴中煮2—3分鐘?？梢杂^察到試管內溶液呈現輕度陽性反應，這是由于蔗糖酶溶液本身含有少量還原性雜質的緣故。因此，用此管作為對照，即可解釋上述用淀粉作底物的試管內呈現輕度陽性反應的原因。
