感受態(tài)DH細(xì)菌細(xì)胞轉(zhuǎn)化方法有哪些嗎?
點(diǎn)擊次數(shù)：1188 更新時(shí)間：2018-08-28
DH的感受態(tài)是指細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法（電擊法、CaCl2法等處理后，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生了暫時(shí)性的改變，成為能允許外源DNA分子進(jìn)入的細(xì)胞，即感受態(tài)細(xì)胞(Compenent cells).那么,感受態(tài)DH細(xì)菌細(xì)胞轉(zhuǎn)化方法有哪些嗎?下面就有小編來為您詳細(xì)介紹一下吧!
1．制冰盒一個(gè)，打開凈化工作臺(tái)電源，使其處于工作狀態(tài)，以下操作除孵育、振蕩菌液外，其余均需在凈化工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。
2．從-80℃冰箱中取出“感受態(tài)DH細(xì)菌細(xì)胞”一支，“試劑A”，從-20℃冰箱中取出無菌雙蒸水一支和待轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA一支，均置冰盒內(nèi)。
3．取消毒1.5 ml Eppendorf管一支，用移液器將待轉(zhuǎn)化質(zhì)粒DNA 1ul、“試劑A”20 ul、無菌雙蒸水80 ul，分別吸入消毒1.5 ml Eppendorf管內(nèi)混勻，冰上備用。將感受態(tài)DH細(xì)菌細(xì)胞80-100 ul吸入消毒1.5 ml Eppendorf管內(nèi)混勻，冰浴20分鐘。隨后，室溫放置10分鐘。
4．在1.5 ml Eppendorf管內(nèi)加入400ul LB液體培養(yǎng)基，37℃，200rpm振蕩10-40分鐘。
5．隨后取100-600 ul鋪平板，于37℃溫箱培養(yǎng)12-16小時(shí)。
