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    煙酰胺腺嘌呤雙核苷酸的生產方法
    點擊次數:1375 更新時間:2018-12-07

           煙酰胺腺嘌呤二核苷酸是一種轉遞質子(更準確來說是氫離子)的輔酶,它出現在細胞很多代謝反應中。NADH或更準確NADH + H+是它的還原形式。它可以被還原,多攜帶兩個質子(寫為NADH + H+)。NAD+是脫氫酶的輔酶,如乙醇脫氫酶(ADH),用于氧化乙醇。它在糖酵解、糖異生、三羧酸循環及呼吸鏈中發揮著不可替代的作用。中間產物會將脫下的氫遞給NAD,使之成為NADH + H+。而NADH + H+則會作為氫的載體,在呼吸鏈中通過化學滲透偶聯的方式,合成ATP。 在吸光方面,NADH+H+在260nm和340nm處各有一吸收峰,而NAD+則只有260nm一處吸收峰,這是區別兩者的重要屬性。這同時也是很多代謝試驗中,測量代謝率的物理依據。NAD在260nm的吸光系數為1.78*104L /(mol*cm),而NADH在340nm的吸光系數為6.2*10? L/(mol*cm)。

    生產方法:
    1.從鮮酵母提取,步驟如下:新鮮壓榨酵母[破壁,提取]提取液[分離]濾液[一次吸附][洗脫]一次洗脫液[中和][二次吸附][洗脫][三次吸附][洗脫]三次洗脫液[沉淀][過濾][干燥]輔酶I
    2.以酵母為原料
    破壁、提取、分離 將新鮮壓榨酵母攪拌下加入等量的沸水,加熱至95℃保溫5min,迅速加入兩倍酵母質量的冰塊,過濾,濾餅用水洗滌2次,合并濾液和洗液,加入強堿性季銨I型陰離子交換樹脂201×7(717),攪拌16h,過濾,收集濾液。
    新鮮壓榨酵母[沸水、冰塊]→提取液[201×7樹脂]→濾液
    吸附、洗脫 濾液用濃鹽酸調pH=2-2.5,經弱酸性丙烯酸系陽離子交換樹脂122柱吸附,用無熱原水洗至流出液澄清為止,再用0.3mol/L氫氧化銨溶液洗脫,當流出液呈淡咖啡色,經340nm分光光度計測定吸光度大于0.05時,開始收集,流出液呈淡黃色時停止,得洗脫液。
    濾液[pH2-2.5]→吸附物→洗脫液
    中和、吸附 將強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂001×7(732)加至洗脫液中,攪拌測pH=5-7,過濾,濾餅用無熱原水洗滌,合并洗液和濾液,加稀氨水調pH值至7(約15%),再用強堿性季銨I型陰離子交換樹脂201×7 (717)50-60目柱進行吸附,用無熱原水洗至流出液澄清無色為止。
    洗脫液[001×7樹脂,氨水,201×7樹脂]→[pH7]吸附物
    洗脫、吸附、洗脫 將766型活性炭60-80目柱與201×7樹脂柱串聯,用0.1mol/L氯hua鉀溶液洗脫,洗脫液立即流經活性炭柱進行吸附,吸附完后解除兩柱串聯,用pH9的無熱原水洗滌,再用pH8的4%乙醇洗滌,后用無熱原水洗至中性,用體積比為丙酮:乙酸乙酯:水:濃氨水=4:1:5:0.02的混合液洗脫,當洗脫液加3倍丙酮產生白色渾濁時,收集洗脫液。
    吸附物[201×7樹脂柱,氯hua鉀,766型活性炭]→洗脫液[活性炭柱]吸附物[無熱原水,乙醇]→[洗至中性]吸附物[丙酮,乙酸乙酯,水,濃氨水]→洗脫液
    沉淀、干燥 洗脫液在攪拌下加30%-40%硝酸調pH=2-2.5,過濾,冰庫過夜,過濾,95%的冷丙酮洗滌,真空干燥,得成品。
    洗脫液[硝酸]→[pH2-2.5, 0℃]沉淀[丙酮]→[干燥]C0I成品。

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