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    遠(yuǎn)慕生物教您學(xué)會配制緩沖溶液!!!
    點(diǎn)擊次數(shù):879 更新時(shí)間:2019-05-27

        在生化研究工作中,常常要用到緩沖溶液來維持實(shí)驗(yàn)體系的酸堿度。研究工作的溶液體系pH值的變化往往直接影響到我們工作的成效。如果提取酶實(shí)驗(yàn)體系的pH值變化或變化過大,會使酶活性下降甚至*失活。所以我們要學(xué)會配制緩沖溶液。
         由弱酸及其鹽組合一起使具有緩沖作用。生化實(shí)驗(yàn)室常常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris(三羥甲基氨基甲烷)等系統(tǒng),在生化實(shí)驗(yàn)或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系,因?yàn)橛袝r(shí)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值,而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的反應(yīng)。
    硼酸鹽:硼酸鹽與許多化合物形成復(fù)鹽、如蔗糖。
    檸檬酸鹽:檸檬酸鹽離子容易與鈣結(jié)合,所以存在有鈣離子的情況下不能使用。
    磷酸鹽:在有些實(shí)驗(yàn),它是酶的抑止劑或甚至是一個(gè)代謝物,重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉淀出來。而且它在pH7.5以上時(shí)緩沖能力很小。
    三羥甲基氨基甲烷:它可以和重金屬一起作用,但在有些系統(tǒng)中也起抑止的作用。其主要缺點(diǎn)時(shí)溫度效應(yīng)。這點(diǎn)往往被忽視,在室溫pH是7.8的Tris一緩沖液,在4℃時(shí)是8.4,在37℃時(shí)是7.4,因此,4℃配制的緩沖液拿到37℃測量時(shí),其氫離子濃度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下,緩沖能力很差。
    緩沖液的pH值由哪些因素決定?
    設(shè)緩沖系統(tǒng)的弱酸的電離常數(shù)為K(平衡常數(shù)),平衡時(shí)弱酸的濃度為[酸],弱酸鹽的濃度為[鹽],則由弱酸的電離平衡式可得下式:
    根據(jù)此式可得出下列幾點(diǎn)結(jié)論:
    (1)緩沖液的pH值與該酸的電離平衡常數(shù)K及鹽和酸的濃度有關(guān)。弱酸一定,但酸和鹽的比例不同時(shí),可以得到不同的pH值。當(dāng)酸和鹽濃度相等時(shí),溶液的pH值與PK值相同。
    (2)酸和鹽濃度等比例也增減時(shí),溶液的pH值不便。
    (3)酸和鹽濃度相等時(shí),緩沖液的緩沖效率為gao,比例相差越大,緩沖效率越低,一般地說緩沖液有效緩沖范圍為PK±1pH。
    從上述可知,只要知道緩沖對的PK值,和要配制的緩沖液的pH值(及要求的緩沖液總濃度)時(shí),可按公式計(jì)算出[鹽]和[酸]的量。這樣算涉及到對數(shù)的換算,較麻煩,前人為減少后人的計(jì)算麻煩,經(jīng)計(jì)算已為我們總結(jié)出pH值與緩沖液對離子用量的關(guān)系列出了表格。講義附錄部分節(jié)錄有磷酸緩沖液的配制表。只要我們知道要配制的緩沖液的pH,經(jīng)查表便可計(jì)算處所用緩沖劑的比例和用量。例如配制500nmpH5.8濃度為0.1M磷酸緩沖液。
    經(jīng)查表知pH5.8濃度為0.2M Na2HPO48.0毫升,而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推論出配制100ml0.1M的磷酸緩沖液需要0.1M Na2HPO48.0毫升,而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。
    所以500ml 0.1M磷酸緩沖液需要Na2HPO4量為:
    需Na2HPO4量為 :
    計(jì)算好后,按計(jì)算結(jié)果稱好藥品,放于燒杯中,加少量蒸餾水溶解,轉(zhuǎn)移入50ml容量瓶,加蒸餾水至刻度,搖勻,便得所需的緩沖液。
     

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