根據比爾定律, 吸光度與試樣濃度成正比, 在不同的吸光度( Absorbance,Abs) 范圍內測量, 可引起不同的誤差.分析工作者應予高度重視.分析樣品濃度太低或濃度太高, 吸光度值超越了合適的范圍, 都不會得到滿意的結果.應使被分析樣品的吸光度范圍控制在一個合理的范圍內.
試樣濃度不能太低, 吸光度不能太小, 信號過小, 光度噪聲的影響較大,使儀器的信噪比下降, 被測試的試樣濃度下限增高和分析誤差增大, 如測試huang曲霉素, 因儀器的噪聲太大, 測試數據從0. 4Ab s 開始就超過1%的相對誤差.
西北大學的高老師在操作ELISA試劑盒實驗的時候發現了一個問題，于是來電向恒遠生物銷售人員吳咨詢：加完顯色液(購買)顯色一定時間后，再加終止液（2M H2SO4，自己配制）后，立即測試其吸光度值，等過幾分鐘再測試吸光度值，發現兩次測得的吸光度值發生衰減。第二次均小于次。
并且，加終止液時，從*條加到第12條后，測試發現，吸光度值從1-12條逐級衰減。前提是這12條酶標板都是同一種產品，并且包被相同蛋白。
高老師向吳詳細的說明了實驗中出現的情況，吳對實驗的問題有了一定的了解，隨后安排技術人員為高老師溝通，為其解決這一問題，高老師恍悟道：原來ELISA吸光度值衰減這樣處理就可以啦。
其實具體的原因也很簡單，有可能是顯色液的質量不夠好。一般情況下，終止反應后OD值的下降前期不是很明顯。終止后，吸光度值是會隨著時間衰減，所以一般是加完終止液后立即測，這樣比較準。
再次分析12條顯示逐級遞減的原因看看是否是：
① 顯色時間調整，如果您現在的顯色時間是10MIN，那調整到30MIN，再加終止液,觀察上述現象是否出現。
② 終止液中加入少量甘油看下怎么樣。
ELISA試劑盒顯色時間是30分鐘，終止后要求在30分鐘內檢測，加入終止液后，在加入終止液后2到3分終內檢測，這是OD值相對比較高。擬合值能達到四個9。
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