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  • 上海遠慕生物科技有限公司

    遠慕課堂:細胞傳代方法您做對了嗎?
    點擊次數(shù):820 更新時間:2019-08-16

    通過自主研發(fā)和兼并重組不斷擴展企業(yè)產(chǎn)品線,逐步發(fā)展為試劑的專業(yè)制造商和電子商務(wù)集成供應(yīng)商,成為試劑行業(yè)發(fā)展的者。開始細胞傳代前,仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全。

    細胞與試劑方面:

    1、細胞(單層細胞,鏡檢適合)

    2、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等適合細胞有要求的培養(yǎng)液)

    3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1 萬單位)

    4、7.5%NaHC03 溶液

    5、0.25%胰蛋白酶

    6、 PBS 洗液。

    實驗小用具方面:

    1、小方瓶(100m1)

    2、克氏瓶

    3、膠塞

    4、吸管(10ml、1m1)

    5、細胞吹打管(20 ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15 分鐘高壓滅菌)

    6、C02 孵箱

    7、超凈臺

    8、倒置顯微鏡

    9、4℃、- 20℃冰箱

     

    細胞傳代的操作步驟

    1、挑選細胞:鏡檢細胞,挑選生長狀態(tài)良好,細胞界限清晰,具有立體感,形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細胞。

    2、配制細胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi),加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。

    3、消化細胞:先用PBS 洗液沖洗細胞表面1-2 次,每次10m1,棄去洗液,向細胞瓶內(nèi)加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細胞瓶平放,使消化液*覆蓋細胞表面。

    4、至細胞*脫落到胰酶中:每瓶加入10m1 細胞培養(yǎng)液吹打分散細胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1 細胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝,然后補加至所需培養(yǎng)量。

    5、加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4 天成片(由細胞接種濃度決定)。

    6、填寫傳代記錄。

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