質(zhì)譜技術(shù)(Mass Spectrometry，MS)具有靈敏度、準(zhǔn)確度、自動(dòng)化程度高的特點(diǎn)，能準(zhǔn)確測(cè)量肽和蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量、氨基酸序列及翻譯后修飾，開(kāi)啟了大規(guī)模自動(dòng)化的蛋白質(zhì)鑒定之門(mén)。而以質(zhì)譜技術(shù)為基礎(chǔ)的定量蛋白質(zhì)，是當(dāng)前研究重大疾病致病機(jī)理及藥理控制機(jī)制的必要手段。目前，定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)主要包括以質(zhì)譜檢測(cè)為核心的穩(wěn)定同位素化學(xué)標(biāo)記（iChemistry™方案）、體內(nèi)代謝標(biāo)記（SILAC技術(shù)）和AQUA多肽技術(shù)，遠(yuǎn)慕生物不斷完善解決方案，旨在幫助客戶解決定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究的難題。
行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)iTRAQ試劑 — 同時(shí)分析8種樣品
多樣品同時(shí)分析使得劑量分析、時(shí)間水平上的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)、生物標(biāo)志物研究和目標(biāo)蛋白質(zhì)的定量等重要研究成為可能。iTRAQ技術(shù)作為一種新穎且方便的蛋白質(zhì)組學(xué)定量研究技術(shù)，已經(jīng)在疾病標(biāo)志物的尋找和不同時(shí)段或者不同狀態(tài)的多樣本定量分析等蛋白質(zhì)組學(xué)研究領(lǐng)域得到了很好的應(yīng)用。
iTRAQ試劑盒包括4種（114、115、116和117）或八種（113、114、115、116、117、118、119和121）相同質(zhì)量的胺活性試劑，能對(duì)蛋白質(zhì)水解的肽段進(jìn)行標(biāo)記，然后用質(zhì)譜技術(shù)對(duì)這些多肽進(jìn)行定量分析。這種簡(jiǎn)單的基于肽段的iTRAQ®工作流程突破了很多局限性，可應(yīng)用于蛋白質(zhì)定量方面的全面研究，包括蛋白質(zhì)翻譯后修飾的定量、親和純化樣品所得蛋白質(zhì)和膜蛋白的定性定量。
技術(shù)特點(diǎn)：
1、實(shí)現(xiàn)對(duì)多組樣品的同時(shí)定性和定量分析
2、使蛋白質(zhì)/蛋白質(zhì)組分析的覆蓋度大化
3、增加了數(shù)據(jù)的可靠性和相關(guān)性：可對(duì)多達(dá)8個(gè)樣品同時(shí)進(jìn)行定量分析
高標(biāo)記率SILAC技術(shù) — 體內(nèi)氨基酸代謝標(biāo)記
SILAC技術(shù)利用標(biāo)記的氨基酸在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)蛋白進(jìn)行標(biāo)記，常用于比較蛋白質(zhì)組學(xué)、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)與DNA相互作用、蛋白質(zhì)與RNA相互作用等領(lǐng)域。Sigma-Aldrich公司提供99%豐度的標(biāo)記氨基酸和不*培養(yǎng)基，可達(dá)到大化標(biāo)記和替代，提高整體的量化精度。
SILAC技術(shù)原理十分簡(jiǎn)單：兩組細(xì)胞同時(shí)培養(yǎng)，A組添加的是正常的“輕型”氨基酸，B組含有穩(wěn)定同位素標(biāo)記的“重型”氨基酸，細(xì)胞傳達(dá)若干代后，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸*摻入到蛋白質(zhì)中，取代了原有的氨基酸。將兩組細(xì)胞混合后提取蛋白，通過(guò)質(zhì)譜鑒定可出現(xiàn)兩段峰值，低分子量的肽段含輕型氨基酸，來(lái)源于A組，高分子量的肽段含重型氨基酸，來(lái)源于B組。如果SILAC肽段對(duì)呈現(xiàn)1:1的比例，則兩組樣品中此蛋白的豐度無(wú)異，反之則有差異。
技術(shù)特點(diǎn)：
1、體內(nèi)標(biāo)記，樣品處理等帶來(lái)的定量偏差較小，結(jié)果更精確
2、標(biāo)記效率高，且不同蛋白的標(biāo)記效率沒(méi)有差異
3、靈敏度高，蛋白質(zhì)需要量少
4、高通量，可同時(shí)鑒定并定量數(shù)百至數(shù)千種蛋白質(zhì)
5、線性定量范圍廣
合成AQUA多肽 — 生物標(biāo)記物定量的終ji方法
AQUA多肽技術(shù)將同位素標(biāo)記的多肽分子作為內(nèi)標(biāo)，利用質(zhì)譜技術(shù)更精確地進(jìn)行生物標(biāo)志物定量、特異氨基酸修飾分析等。AQUATM肽段都經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的測(cè)試，保證其達(dá)到高純（HPLC）、精確原子量（ESI-MS）及其多肽特異性，以滿足對(duì)蛋白標(biāo)記物進(jìn)行精確高效的質(zhì)譜定量。
AQUA肽段是根據(jù)目標(biāo)多肽合成的胰蛋白酶肽，每個(gè)AQUA肽包含一個(gè)穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸，分子量增加6-10道爾頓，與內(nèi)源肽混合后通過(guò)質(zhì)譜分析，已知含量的AQUA肽作為內(nèi)標(biāo)可以對(duì)內(nèi)源肽進(jìn)行精確定量。
技術(shù)特點(diǎn)：
1、更專注于重要蛋白標(biāo)記物的分析
2、準(zhǔn)確定量低豐度蛋白，測(cè)定位點(diǎn)特異性的磷酸化等修飾
3、技術(shù)流程簡(jiǎn)單易操作，無(wú)需昂貴、耗時(shí)的同位素標(biāo)記過(guò)程
