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  • 上海遠慕生物科技有限公司

    班氏試劑的配制實驗
    點擊次數:1498 更新時間:2020-08-05

    班氏試劑的配制與鑒定結果

    班氏試劑的配置

    取無水硫酸銅1.47g,溶于100ml熱水中,冷卻后稀釋到150ml,取檸檬酸鈉173g,無水碳酸鈉100g和600ml水共熱,溶后冷卻并加水至850ml,再將冷卻的150ml硫酸銅傾入即可。

    鑒定糖尿的結果:

    沸水浴加熱后的現象 葡萄糖含量(g/dl)

    透明藍色 無

    加熱時無變化,僅冷卻后有少量沉淀 微量,約0.5以下

    加熱1分鐘后即出現少量黃綠色沉淀 少量,約0.5-1

    加熱10-15秒后即出現土黃色沉淀 中量,約1-2

    加熱時很快出現多量磚紅色沉淀 大量,約2以上

    班氏試劑與斐林試劑比較:

    首先,兩者的配方不一樣。斐林試劑主要由質量濃度為0.1g?mL-1的NaOH溶液和質量濃度為0.05g?mL-1的CuSO4溶液配制而成。其中0.1g?mL-1的NaOH溶液稱為斐林試劑甲,0.05g?mL-1的CuSO4溶液稱為斐林試劑乙。而班氏試劑的配方為:

    ①400mL水中加85g檸檬酸鈉和50g無水碳酸鈉;

    ②50mL加熱的水中加入8.5g無水硫酸銅,制成CuO4溶液;

    ③把CuSO4溶液倒入檸檬酸鈉?Na2CO3溶液中,邊加邊攪,如產生沉淀可濾去。

    其次,兩者在反應原理上略有差別。利用斐林試劑鑒定時,斐林試劑甲和斐林試劑乙直接反應產生Cu(OH)2,Cu(OH)2和可溶性還原糖反應產生磚紅色沉淀。而班氏試劑中Cu(OH)2的產生卻是這樣的:檸檬酸鈉和碳酸鈉均為強堿弱酸鹽,在水中它們均可水解產生OH-,與檸檬酸鈉?Na2CO3溶液和CuSO

    4溶液混合時,Cu2+和OH-結合,生成Cu(OH)2,Cu(OH)2與葡萄糖中的醛基反應產生磚紅色沉淀。

    第三,兩種試劑的保存方式不同。斐林試劑甲和斐林試劑乙可強烈反應產生Cu(OH)2,Cu(OH)2很容易沉淀析出,因此斐林試劑一般為現用現配;而班氏試劑的配方中,檸檬酸鈉?Na2CO3為一對緩沖物質,產生的OH-數量有限,與CuSO4溶液混合后產生的Cu(OH)2濃度相對較低,不易析出,因此該試劑可長期保存。

    無論利用班氏試劑還是斐林試劑,歸根結底都是Cu(OH)2與醛基反應而生成磚紅色的Cu2O沉淀,因此兩者反應現象一樣25v;

    可溶性還原糖的鑒定:

    生物組織中普遍存在的可溶性糖種類較多,常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。葡萄糖、果糖和麥芽糖的分子內含有醛基,醛基具有還原性,可與弱氧化劑反應。與醛基有特定顏色反應的化學試劑可用來鑒定這三種糖的存在。

    (1)利用斐林試劑:斐林試劑由質量濃度為0.1g/mL的Na0H溶液和質量濃度為0.05g/mLL的CuS04溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡藍色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2在加熱條件下與醛基反應,被還原成磚紅色的Cu2O沉淀,醛基則被氧化為羧基。可見用斐林試劑只能鑒定還原性糖,不能鑒定可溶性的非還原性糖。用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時,溶液的顏色變化過程為:淺藍色→棕色→磚紅色(沉淀)。

    (2)利用班氏試劑:班氏試劑由A液(硫酸銅溶液),B液(檸檬酸鈉和碳酸溶液)配制而成。將A溶液傾注人B液中,邊加邊攪,如有沉淀可過濾。實驗原理與斐林試劑相似,所不同的是班氏試劑可長期使用。

    (3)利用銀氨溶液:銀氨溶液是在2%的AgNO3溶液中逐滴滴人2%的稀氨-水,至初產生的沉淀恰好溶解為止,這時得到的溶液就是銀氨溶液。銀氨溶液中含有Ag(NH3)20H(氫氧化二氨合銀),這是一種弱氧化劑,能把醛基氧化成羧基,同時Ag+被還原成金屬銀。還原生成的銀附著在試管壁上,形成銀鏡。可見,銀鏡反應也可用于鑒定可溶性還原糖。鑒定的結果是出現銀鏡。

    2.用班氏試劑鑒定可溶性還原糖,比用斐林試劑更簡便。

    斐林試劑要現配現用,否則實驗難以得到滿意結果,因為此反應利用的是斐林試劑中的Cu(OH)2產物作為弱氧化劑參與與還原糖的反應,而我們知道,Cu(OH)2是一種沉淀物質,放置過久沉淀過多則不利于反應,而班氏試劑是斐林試劑的改良,它利用檸檬酸作為Cu2+的絡合劑,使溶液穩定、靈敏度高且可以長期使用,故更簡便。

    3.利用斐林試劑或班氏試劑可以進行尿糖檢測。

    實驗原理 尿液中葡萄糖屬可溶性還原糖,可以用班氏試劑或斐林試劑檢驗。

    材料器具 人體新鮮尿液,試管,酒精燈,試管夾,火柴,滴管,班氏試劑。

    步驟:

    (1)在試管中加入1mL班氏試劑,加熱到沸騰,如不變色,則可使用。

    (2)再在試管中滴人2滴新鮮澄清的尿液,搖勻。

    (3)加熱上述混合液到沸騰,并持續2min~3min。

    (4)觀察試管內混合液顏色是否發生變化,是否有沉淀物產生,并按表5提示作出判斷記錄。

    混合液現象 ―記錄符號 含糖量

    混合液呈藍色或藍灰色 - 0.02g/100mL

    出現淺黃綠色沉淀 + (0.1~0.5g)/100mL

    出現黃綠色沉淀 ++ (0.5~1.4g)/100mL

    出現黃色沉淀 +++ (1.4~2.0g)/100mL

    出現橘黃色沉淀 ++++ 2.0g/100mL

    注意事項:

    (1)班氏試劑和尿液混合液的體積比例應為10:1。

    (2)如是糖尿病人,檢驗前兩三天-好停止服藥。

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