質(zhì)粒小量提取試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題與解析
點(diǎn)擊次數(shù)：1097 更新時(shí)間：2020-10-30
質(zhì)粒小量提取試劑盒常見(jiàn)從1～4mL菌液可以抽提到5～30?g的質(zhì)粒，純度高，OD260/OD280比值一般為1.8-2.0之間，質(zhì)粒可直接用于PCR、酶切、轉(zhuǎn)化測(cè)序和體外轉(zhuǎn)錄等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。那么在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中常見(jiàn)問(wèn)題有哪些，下面跟小編一起來(lái)看一下。
質(zhì)粒得率低可能原因及解決辦法：
1、菌體未活化，生長(zhǎng)效率低，菌量少。需要活化菌種。
2、屬于低拷貝質(zhì)粒，增加菌液的量。
3、SolutionB裂解不充分，室溫靜置5min。
4、后洗脫體積不夠，洗脫液不少于50?L。
質(zhì)粒純度差可能原因：
1、SolutionA未加入RNaseA或加入RNaseA的SolutionA 未4℃保存。
2、加入SolutionB劇烈震蕩，使得基因組斷裂。
3、加入BufferN操作慢，形成微小沉淀，蛋白質(zhì)無(wú)法被充分漂洗干凈。
4、BufferW2未加入無(wú)水乙醇。
5、OD260/OD280比值一般在1.8-2.0之間，小于1.8可能有蛋白污染，大于2.0有部分降解或RNA污染。
