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  • 上海遠慕生物科技有限公司

    關于HPLC的常見問題及解答
    點擊次數:645 更新時間:2021-03-03

    一、問:液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什么?

    答:

    1.篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。
    2.存在干擾峰,解決辦法為使用較長的柱子,改換流動相或更換選擇性好的柱子

    二、問:用HPLC進行分析時保留時間有時發生漂移,有時發生快速變化,原因何在?如何解決?

    答:關于漂移問題:
    1.溫度控制不好,解決方法是采用恒溫裝置,保持柱溫恒定
    2.流動相發生變化,解決辦法是防止流動相發生蒸發、反應等
    3.柱子未平衡好,需對柱子進行更長時間的平衡
    關于快速變化問題
    1.流速發生變化,解決辦法是重新設定流速,使之保持穩定
    2.泵中有氣泡,可通過排氣等操作將氣泡趕出。
    3.流動相不合適,解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內進行適當混合

    三、問:HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

    答:

    1.樣品量不足,解決辦法為增加樣品量 醫.學教育網搜集整理
    2.樣品未從柱子中流出??筛鶕悠返幕瘜W性質改變流動相或柱子
    3.樣品與檢測器不匹配。根據樣品化學性質調整波長或改換檢測器
    4.檢測器衰減太多。調整衰減即可。
    5.檢測器時間常數太大。解決辦法為降低時間參數
    6.檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。
    7.檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。
    8.記錄儀測壓范圍不當。調整電壓范圍即可。
    9.流動相流量不合適。調整流速即可。
    10.檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器,重作校正曲線。

    四、問:做HPLC分析時,柱壓不穩定,原因何在?如何解決?

    答:原因可能有:
    1.泵內有空氣,解決的辦法是清除泵內空氣,對溶劑進行脫氣處理;
    2.比例閥失效,更換比例閥即可;
    3.泵密封墊損壞,更換密封墊即可;
    4.溶劑中的氣泡,解決的辦法是對溶劑脫氣,必要時改變脫氣方法;
    5.系統檢漏,找出漏點,密封即可;
    6.梯度洗脫,這時壓力波動是正常的。

    五、問:我購買的HPLC柱驗收測試時柱壓過高,請問為什么?

    答:柱壓過高是HPLC柱用戶-常碰到的問題。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的問題,您可按下面步驟檢查問題的起因。
    1.拆去保護預柱,看柱壓是否還高,否則是保護柱的問題,若柱壓仍高,再檢查;
    2.把色譜柱從儀器上取下,看壓力是否下降,否則是管路堵塞,需清洗,若壓力下降,再檢查;
    3.將柱子的進出口反過來接在儀器上,用10倍柱體積的流動相沖洗柱子,(此時不要連接檢測器,以防固體顆粒進入流動池)。這時,如果柱壓仍不下降,再檢查;
    4.更換柱子入口篩板,若柱壓下降,說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質,正是這些雜質將篩板堵塞引起壓力上升。

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