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  • 上海遠慕生物科技有限公司

    植物組織培養基的配制方法
    點擊次數:1346 更新時間:2021-05-19

    一、母液的配制和保存

    在植物組織培養工作中,配制培養基是日常bi備的工作。為簡便起見,通常先配制一系列母液(stockso1utlon),即貯備液。所謂母液是欲配制液的濃縮液,這樣不但刊以侏讓各物質成分的準確性及配制時的快速移取,而且還便于低溫保藏。一般母液配成比所需濃度高10~100倍。母液配制時可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物和激素類等。配制時注意一些離子之間易發生沉淀,如Ca2+和S042-、Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后,會產生沉淀,一定要充分溶解再放入母液中。配制母液時要用蒸餾水或重蒸餾水。藥品應選職等級較高的化學純或分析純。藥品的稱量及定容都要準確。各種藥品先以少量水讓其充分溶解,然后依次混合。一般配成大量元素、微量元素、鐵鹽、維生索等母液,其中維生素、氨基酸類可以分別配制,也可以混在一起。母液配好后放入冰箱內低溫保存,用時再按比例稀釋。

    下面以MS培養基制備為例,概述其制備方法,為MS基本培養基4種母液成分配制。

    (1)大量元素母液可配成濃度10倍母液。用分析天平按表25稱取藥品,分別加100mL左右蒸餾水溶解后,再用磁力攪拌器攪拌,促進溶解。注意Ca2+和PO3-4易發生沉淀。然后倒入1000mL定容瓶中,再加水定容至刻度,成為10倍母液。

    (2)微量元素母液可配成100倍的母液。用分析天平按表準確稱取藥品后,分別溶解,混合后加水定容至1000mL。

    (3)鐵鹽母液可配成100倍的母液,按表稱取藥品,可加熱溶解,混合后加水定容至1000mL。

    (4)有機物母液可配成l00倍的母液。按表分別稱取藥品,溶解,混合后加水定容至1000mL。

    (5)激素母液每種激素必須單獨配成母液,濃度一般配成1mg/mL。用時根據需要取用。因為激素用量較少,一次可配成50mL或100mL。另外,多數激素難溶于水,要先溶于可溶物質,然后才能加水定容。

    激素的配法如下:將IAA、IBA、GA等先溶于少量的95%的酒精中,再加水定容至一定濃度。NAA可先溶于熱水或少量95%的酒精中,再加水定容到一定濃度。2,4一D可用少量1mo1/L NaOH溶解后,再加水定容到一定濃度。將KT和BA先溶于少量1mol/L的HCl中再加水定容。將玉米素先溶于少量95%的酒精中,再加熱水定容到一定濃度。配制好的母液瓶上應分別貼上標簽,注明母液名稱、配制倍數、日期及配lL培養基時應取的量。

    二、培養基的配制及其滅菌

    1.培養基的配制

    用量簡移取大量元素母液l00mL,用專一對應的移液管分別吸取微量元素母液10mL、鐵鹽母液10mL、有機物母液10mL,均置入1000mL定容瓶中,若不加任何激素,則為MS配養基;若需加激素按配方移取激素母液即可。

    將已裝母液的定容瓶用蒸餾水或自來水定容到1000mL,取1/3左右倒入小鋁鍋中加熱。同時,稱好30g蔗糖,稱瓊脂絲7g(或瓊脂粉),也傾入小鋁鍋中,邊加熱邊攪拌,防止糊底。旺火煮開,再用文火加熱,直至瓊脂全鄙融化即清澈見底為度(若用瓊脂粉,應加入100mL,左右的液體培養基,并攪拌均勻)。然后再傾入定容瓶內余下的液體培養基,搖晃均勻即可。

    培養基配好后,要調整pH值。用0.1mol/L的NaOH或HCI液調成pH值5.8左右。在培養基配方不大變動的情況下可用經驗法。可以將連續3次測定所加入的酸或堿液的平均值作為以后調整的用量值。調后注意一定要搖動均勻,還要注意酸或堿液不要放置時間太久。

    2.培養基的分裝與滅菌

    培養基配好后要趁熱分裝,l00mL的容器約裝入30~40mL培養基,即1L培養基約裝35瓶左右。太多則浪費培養基,太少不易接種和影響生長。但要根據培養對象來決定。如果培養時間較長時,應適當多裝培養基;生根等短期培養時,可適當少加培養基。分裝時不要把培養基弄到管壁上,以免日后污染。裝后用封口材料包上瓶口,扎口后,寫上培養基種類,準備滅菌。注意不能放置時間過長,以免產生污染。

    分裝好的培養基置于高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌,滅菌條件為溫度121℃,壓力0.1lMPa。

    具體操作方法為:打開鍋蓋,加水至水位線。把已裝好培養基的三角瓶,連同蒸餾水及接種用具等放入鍋筒內,裝時不要過分傾斜培養基,以免弄到瓶口上或流出。然后蓋上鍋蓋,對角旋緊螺絲,接通電源加熱,當升至0.05MPa時,打開放氣閥放氣,氣壓指針回“0”,后關閉放氣閥。當氣壓上升到0.1lMPa時,保壓滅菌20~35min,到時停止加熱。當氣壓回“0”后打開鍋蓋,取出培養基,放于平臺上冷凝。滅好菌的培養基不要放置時間太長,最多不能超過1周。

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