蛋白Marker使用常見問題分析
點擊次數(shù)：795 更新時間：2021-05-25
做蛋白表達實驗時，通常用SDS-PAGE電泳檢測目的蛋白的表達情況，MARK是其中非常重要的參照物，使用Mark會遇到以下幾種情況：
條帶模糊：
電壓過高或電泳時間過長，產(chǎn)熱過多導(dǎo)致電泳緩沖液溫度升高。建議參照Trans產(chǎn)品使用說明書。
電泳緩沖液陳舊，建議使用新鮮的電泳緩沖液，為了獲得理想的結(jié)果建議在使用前將緩沖液預(yù)冷。
分離膠的濃度偏低，建議使用合適的膠濃度。
SDS-PAGE凝膠放置時間過長，建議使用新配制的凝膠電泳。
帶型不整齊：
建議點樣時將蛋白marker 放在泳道中間。如在凝膠兩側(cè)泳道，由于邊緣效應(yīng)，離子強度不勻等，均會導(dǎo)致帶型變寬或彎曲。
凝膠配制不勻，凝膠內(nèi)存有氣泡，或點樣孔中有細碎的殘膠。
樣品滯留點樣孔：
濃縮膠配制有問題或膠孔堵塞。
Marker蛋白表達檢測
免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique )又稱熒光抗體技術(shù)，是標記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。
技術(shù)原理
免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原-抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在抗體的性質(zhì)和定位。
