蛋白純化實驗中生物緩沖液的選擇
點擊次數：719 更新時間：2021-11-22
蛋白質的結構和功能需要在合適的pH值環境中才能維持，因此在蛋白的制備及純化過程中，生物緩沖液的選擇非常重要，只有合適的緩沖液才能保證蛋白的活性和結構穩定。
蛋白純化過程緩沖液作用
用于蛋白純化的緩沖劑有很多種，在維持體系的pH同時，要保證蛋白在純化過程中不能失活，或者是盡量減少蛋白失活的量，在蛋白純化的每一個步驟中都要保持蛋白的可溶性和活性。
蛋白純化緩沖液要求
蛋白純化過程中的緩沖液既要防止蛋白降解，也要防止蛋白聚合，其對實驗結果影響顯著。在選擇和試劑緩沖液時應考慮以下幾個因素：pH值、緩沖體系、鹽離子、還原劑和穩定劑。其中每一個因素都要根據所純化的目標蛋白進行優化，并以目標蛋白的活性作為優化的評估標準。
了解蛋白穩定性條件
蛋白的種類很多，不同的蛋白適應的pH值有差異，需根據其最適pH值來選擇緩沖液。很多時候采用的是pH是7.4，這是模仿的生物條件，大多數蛋白在這個pH值下是穩定的。不過也有一些是例外的，這就需要調整pH值，以保持蛋白是可溶的且不會降解。
蛋白純化常用的緩沖劑
蛋白純化過程中常用的緩沖液有Tris、Tricine、Bis-Tris、MOPS等，其中普遍的是用Tris，它的緩沖范圍接近生理pH值，且有著較低的離子強度，是蛋白質的良好溶劑，能保證蛋白的穩定性。需注意的是配制緩沖液時，盡量避開目標蛋白的等電點pl。因為蛋白在其等電點的pH溶液中表面沒有靜電荷，帶百分子間排斥力減小，容易聚集，溶解度降低。
現在需純化的蛋白的適應pH值、等電點、以及緩沖液的緩沖范圍都是可以查到的，直接按對應要求匹配即可
