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  • 上海遠慕生物科技有限公司

    PCR實驗室污染?遠慕教你萬能應急法
    點擊次數:555 更新時間:2022-04-08

     PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優勢已經被廣泛應用,不過正是由于它靈敏度*,極微量的污染源都有可能導致檢測結果的假陽性,因此所有的預防措施都會稍稍有所不同。「易查不易察」,污染來的悄無聲息,我們該如何應對。

    那么,如何避免以及處理實驗室污染,對PCR人來說是一門必修課。

     

     

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    PCR 實驗室污染分類

    1、樣本間交叉污染

    主要是在采(取)樣的過程中,由于取樣工具之間的交叉造成污染;或者在核酸提取的過程中,由于移液器、離心管等使用不當導致的污染。

    2、PCR試劑污染

    主要是在 PCR 組分試劑加樣過程中,由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。

    3、PCR擴增產物污染

    這是 PCR 反應中最主要最常見的污染問題。因為 PCR 產物拷貝量大,遠遠高于 PCR 檢測數個拷貝的極限,所以極微量的 PCR 產物污染,就可形成假陽性。

    還有一種容易被忽視的污染,是能造成PCR產物污染形式的氣溶膠污染,而氣溶膠造成的污染是一個值得特別重視的問題。

    4、克隆質粒污染

    在實驗操作中會經常用到陽性參考品,這些參考品大多數是由某些克隆質粒制作而成的,質粒在單位容積內濃度高,不小心使用極易造成污染。

    實驗室污染處理方法

    1.物料準備

    (1).購買噴壺(能夠噴出霧狀水汽的即可);

    (2).購買市面上有效氯消毒片,根據要求配置不同濃度的消毒液,或者購買成品次氯酸鈉消毒液配制合適濃度消毒水;

    (3).購買核酸氣溶膠污染清除劑(DNA AWAYO?原液/MediClean⑧稀釋100倍);

    (4).無紡布/無塵紙等。

    2.應急處理方法

    (1).清理廢液缸并且對廢液缸用有效氯含量為2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染;

    (2).用有效氯含量為2000mg/L消毒水對移液槍進行擦洗,關鍵部位為移液槍前端易污染部位,清潔干凈后用潔凈水再擦拭一遍;

    (3).將離心管架、擴增管架、擴增管架底板、吸嘴盒及其他相關物品用有效氯含量為500mg/L的消毒水浸泡2小時后,用清水沖洗干凈晾干后使用;

    (4).對污染區域內的設備如擴增儀、全自動提取儀等,使用核酸氣溶膠污染清除劑進行反復處理;對生物安全柜等含有空氣過濾系統的設備,需更換過濾網;

    (5).用有效氯含量為500mg/L的消毒液對整個實驗室(地板、墻面、天花板、門、窗戶等地方)進行清潔,并且用用有效氯含量為1000mg/L的消毒水對實驗室進行噴霧消毒(重點部位為操作區),有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實驗臺表面的核酸污染;同時加大通風量(內循環無用,盡可能外循環);

    (6).待污染區域及設備器件清理完成后,常用設備和操作臺面使用移動紫外消毒車近距離輻照1小時;實驗室內則使用室內紫外燈整晚輻照。

    以上措施每日進行,直至污染消除;步驟(1)-(6)必須堅持每天進行,確保消除實驗室污染;

    3.消除污染判定標準

    設計陰性對照組,根據陰性對照確認污染情況。可使用敞開后隔夜放置操作區的陰性對照進行實驗(在單獨的實驗室驗證),若連續三天陰性對照沒有起跳,則說明污染得到控制,可恢復正常實驗。

    污染,是 PCR 實驗室出現實驗假陽性、結果不可信、研發不可靠的重要推手。

    在最初開展PCR實驗室的時候,應最/大程度的降低可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現,在實驗室前期設計及日常實驗室管理和操作中,就需要進行合理的規劃以及嚴格執行實驗室SOP,把污染的可能性扼殺在搖籃中。

     

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