近年來，細菌感染性疾病嚴重威脅著人類的健康，抗生素的合理使用是治療和控制此類疾病的有效手段，抗生素體外藥敏試驗結果的正確與否對抗生素的選擇至關重要，藥敏試驗的結果受到諸多因素的影響，如培養基、試紙片以及菌液的濃度等。
1、培養基
細菌藥敏試驗所用的培養基種類較多，多數情況下，采用WHO組織統一要求的M-H培養基，這種培養基中含有的低胸腺嘧啶是與磺胺類藥物競爭的物質，因此進行的藥敏試驗效果較好。此外，還有適量的Ca2+、Mg2+，在培養基中起到觸媒的作用。但是，有些細菌對培養基中的成分有特殊的要求，特殊的菌要用特殊的培養基才能進行藥敏試驗。例如，流感嗜血桿菌的藥敏試驗培養基用HTM瓊脂；淋球菌的藥敏試驗培養基用加5％羊血的巧克力M-H瓊脂；肺炎鏈球菌的藥敏實驗用M-H瓊脂加5％的脫纖維羊血培養基。培養基中還有適量的Ca2+、Mg2+，在培養基中起到溶酶的作用，其含量的變化，可影響氨基糖苷類和四環素對銅綠假單胞菌的試驗結果，含量過高，抑菌圈會變小，含量過低，抑菌圈會大得不可接受。
細菌藥敏試驗的培養基厚度大約為4mm，若培養基厚度大于4mm，會使細菌出現耐藥；若小于4mm，本應耐藥的易出現敏感。所以，試驗時一定不要把藥敏紙片放在中央部位，而應均勻地排布在平皿周圍的培養基上。制作藥敏試驗的培養基用水，主要是Ca2+、Mg2+等礦物質離子，也在很大程度上影響著藥敏試驗的結果。
2、試紙片
試紙片材質的好壞，對藥物穩定性和活性有很大影響。加工藥敏試紙片的試紙一般是使用加厚型的濾紙，雜質少，對藥物保存無太大影響。然而，臨床中很多用的是普通紙，被水浸潤后會呈堿性，并且含有大量無機離子，因此使用普通紙加工的試紙片藥物有較大的影響。藥敏紙片的PH值一般要求為中性，這樣才適合藥的活度。藥敏紙片的厚度要求大約1mm，這樣才有利于細菌的生長和藥物的擴散速度。藥敏紙片的直徑在6.00～6.35mm之間，紙片的厚度和直徑大小都會影響藥敏試驗的結果。
含藥紙片的片間差和質量好壞是做藥敏試驗的關鍵。一些藥敏紙片買來時就有抑菌環偏大或偏小的問題，紙片之間又存在很大的片間差。因此，紙片在用前必須檢驗其片間差和準確度，只有都達到標準要求后才能使用。同時要注意紙片的保存，因為有的紙片，如青/霉素類，在保存中因為受潮濕環境的影響容易降低其藥物的活性。因此，紙片應放低溫下(-10℃)保存，同時要避免潮濕，以保持抗菌藥物的活性。盛紙片小瓶自低溫處取出應在室溫平衡至少10min后再打開，避免冷凝水影響藥效。
3、細菌
由于各種菌對藥物的敏感性不同，產生的抑菌環大小不同，如果菌種不純，試驗中所產生的抑菌環大小與該菌種在純培養狀態下產生的抑菌環大小存在較大的差異，影響判斷結果的準確性。因此需要對各種致病菌提純后，分別進行不同的藥敏試驗。藥敏試驗時，需要將提純后的菌種配制成一定濃度的菌液。WHO組織制定的標準是要求菌液濃度在1．5億/ml左右。若菌液濃度過高，該菌會對所有藥物產生耐藥；反之，菌液濃度過低，該菌會對所有藥物均敏感。最/精確的方法是使用分光光度計測定新鮮培養物菌懸液的吸光度，來確定菌液濃度。國家細菌耐藥性監測網的三級甲等醫院，其微生物實驗室大多數用此法來確定藥敏試驗的菌液濃度。
藥敏試驗中要將菌液均勻地涂在培養基上，使細菌均勻分布，這樣才能使試驗結果不會出現較大的偏差。涂菌后15min才能貼藥敏紙片。由于涂菌后，細菌要有一段時間的適應過程，但是時間不能過長，否則會使細菌產生耐藥。貼藥敏紙片時，每取一種藥敏紙片必須燒一下鑷子口，避免藥敏紙片之間相互混淆，以提高藥敏的準確性。藥物殺滅細菌存在一定的量比，藥敏試驗培養基上細菌層越厚抑菌圈就越小，反之抑菌圈就越大。根據一種藥物抑菌圈的有無或者大小，只能判斷出該藥對細菌有沒有效果，但其敏感性的高低需要通過科學嚴謹的實驗來確定。藥物的敏感程度需要根據藥敏試驗的結果，并結合以上因素做綜合分析，才能得出科學的結論，而片面地根據藥敏圈的大小來決定敏感與否，結果不夠準確。
綜上所述，造成藥敏試驗的結果可能與實際效果不符，對藥敏試驗要具體情況進行相應的分析，再根據藥物的代謝過程和原理綜合論證，藥敏試驗的指導意義還是很大的。而且上述因素并不是在我們臨床做藥敏試驗過程中都能遇到，對此，我們需要認真執行標準化的試驗方法，認真執行CLSI質控要求，做好室內質控與室間質評，以提高試驗的準確性。嚴格控制藥敏試驗用培養基和藥敏紙片，做到保證質量。
