微生物操作中常見問題的討論與分析
1、 劃線獲得單個菌落的方法。劃不出單個菌落的原因：
(1) 平板上有過多的水分；
(2) 劃線時接種環未經反復灼燒；
(3) 多區劃線，三區或四區劃線。
2、 涂布和傾注的區別：
涂布利于觀察，但由于涂布棒上會帶有少量的菌液，可能影響計數的準確性；傾注更為準確，但不利于觀察菌落的狀態。
3、 培養基配制時應注意的問題：
(1)滅菌溫度要嚴格控制，按照要求滅菌，尤其含糖量較高的培養基溫度不應太高，過高會導致糖分焦化，影響質量；
(2)瓊脂培養基不能反復溶化。反復溶化會破壞培養基中的營養成分；
(3)培養基不能反復滅菌，反復滅菌也會導致營養成分的破壞；
(4)含瓊脂的培養基滅菌后，要搖勻。
4、 平板的保存：
大多數平板如 VRBA、DC、尿素酶生化管、顯色系列等要避光低溫保存。
5、 產品的保存：
(1) 干粉培養基：避光干燥，結塊后不能使用。
(2) 亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等：冷凍保存，使用時，要常溫解凍，避免水浴加熱。
(3) 抗生素類：冷藏保存，溫度過高會導致靈敏度的下降。
(4) 兔血漿：冷藏保存少量的紅色不會影響結果。
6、 觀察時間的掌握：
按 SN、GB 等標準或培養基的使用說明所述時間進行觀察，時間過短或時間過長，單菌落的特征都不會很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養基，時間短單菌落看不到卵磷/脂環，時間長綿羊李氏菌也會產生沉淀環。OXA、PALCAM的觀察也如此，時間過長，李氏菌使整個平板成黑色，不利于觀察單個菌落。
7、 添加劑的添加：
(1)溫度的掌握。卵黃和抗生素類添加的溫度都不應太高。
(2)定量。過多會抑制一些目標菌，太少又導致雜菌的過度生長。
8、 培養溫度的掌握：
(1)真菌類。25-28℃培養
(2)細菌類。李氏菌在增菌和生化中要求培養溫度在 30℃左右。
(3)其他一般在 36℃左右。
9、 接種方法：
常用的方法主要有劃線、三點接種、穿刺接種、傾注接種、涂布接種、液體接種。
10、革蘭氏染色方法：
染色時間的掌握、沖洗的方法。
11、生化實驗：
(1)接種的方法
(2)氧化型和發酵型實驗操作
(3)陽性菌種的對照
(4)接種前的純化。挑取單個菌落進行一系列的生化。
12、關于殺菌的幾個概念：
(1)抑制：是在亞抑制劑量因子作用下導致微生物生長停止，但在移去這些因子后生長仍可以恢復的生物學現象。
(2)死亡：在致死劑量因子的作用下或在亞致死劑量因子長時間的作用下，導致微生物生長能力不可逆喪失，即使移去這種因子后生長仍不能恢復的生物學現象。
(3)防腐：在某些化學物質或物理因子作用下，能防止或抑制微生物生長的一種措施，它能防止食物腐/敗或防止食物霉變。
(4)消毒：利用某種方法殺死或滅活物質或物體中所有/病原微生物的一種措施，它可以起到防止感染和傳播的作用。
(5)滅菌：利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內的所有/病原微生物的一種措施。
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