如何分辨抗體是磷酸化還是非磷酸化
點(diǎn)擊次數(shù)：604 更新時(shí)間：2022-10-13
磷酸化和非磷酸化的抗體主要區(qū)別有：
1.磷酸化抗體的檢測的是出于活性狀態(tài)（磷酸化）的蛋白。
2.磷酸化抗體只針對磷酸化位點(diǎn)設(shè)計(jì)，是一種位點(diǎn)特異性的多抗，這到有些單抗的特性。3.普通抗體的合成（多抗）：原核表達(dá)蛋白->純化->免疫動(dòng)物->收獲抗體。
4.磷酸化抗體合成：人工合成含磷酸化位點(diǎn)的多肽->人工體外磷酸化->鏈接半抗原->免疫動(dòng)物->收獲抗體。
5.磷酸化的蛋白很大部分是轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子。因此使用磷酸化抗體和普通抗體。檢測同一個(gè)蛋白，原位檢測可能具有不同的細(xì)胞定位。轉(zhuǎn)錄因子磷酸化后由細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核。
6.一般而言，磷酸化蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分子功能更直接相關(guān)。
非磷酸化抗體是測該蛋白的含量，不能知道其活性狀態(tài)，磷酸化抗體是測該蛋白的磷酸化水平如何，側(cè)重于了解該蛋白的一種活性狀態(tài)。
磷酸化抗體主要是針對磷酸化位點(diǎn)制備的,檢測該蛋白在細(xì)胞受到刺激時(shí)該蛋白的變化情況(磷酸化水平增強(qiáng)還是減弱)。
非磷酸化抗體(主要針對非磷酸化位點(diǎn)的肽段制備的)主要檢測組織或細(xì)胞中該蛋白的表達(dá)情況,組織分布或細(xì)胞中定位,同時(shí)可以作為磷酸化水平變化的內(nèi)參等.。
