提高質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化效率的方法
點擊次數(shù)：986 更新時間：2022-11-17
1.細胞生長狀態(tài)和密度:
不要用經(jīng)過多次轉(zhuǎn)接或儲于4℃的培養(yǎng)菌，最好從-70℃或-20℃甘油保存的菌種中直接轉(zhuǎn)接用于制備感受態(tài)細胞的菌液。細胞生長密度以剛進入對數(shù)生長期時為好，可通過監(jiān)測培養(yǎng)液的OD600來控制。DH5α菌株的OD600為0.5時,細胞密度在5×107個/ml左右(不同的菌株情況有所不同),這時比較合適。密度過高或不足均會影響轉(zhuǎn)化效率。
2.質(zhì)粒的質(zhì)量和濃度:
用于轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA應(yīng)主要是超螺旋態(tài)DNA(cccDNA)。轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比,但當(dāng)加入的外源DNA的量過多或體積過大時,轉(zhuǎn)化效率就會降低。1ng的cccDNA即可使50μl的感受態(tài)細胞達到飽和。一般情況下,DNA溶液的體積不應(yīng)超過感受態(tài)細胞體積的5%。細胞周期,細胞周期蛋白,檢測步驟方法,結(jié)果分析,細胞周期調(diào)控點,細胞周期的調(diào)控機制,細周期蛋白激酶,間期分裂期,時間,細胞周期試劑盒。
常用的質(zhì)粒載體
載體種類：質(zhì)粒、噬菌體、腺病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體
質(zhì)粒特點：
存在于細菌染色體外的小型環(huán)狀DNA分子。
具有自我復(fù)制功能。
帶有抗性基因及表型識別等遺傳性標(biāo)記物。
經(jīng)改造后具有多克隆位點。
舉例：pMD-18T質(zhì)粒、pUCl9質(zhì)粒、pBR322質(zhì)粒等
