高溫滅菌是指用熱能殺死微生物。其原理是高溫使原生質中的蛋白質變性、使酶失活，致使微生物死亡。高溫滅菌主要有高壓蒸汽滅菌法、干熱滅菌法和灼燒滅菌法幾種。如果操作不當，即達不到預期的滅菌效果。現就常見錯誤分析如下：
1、高壓蒸汽滅菌
蒸汽滅菌屬濕熱滅菌，由于濕熱滅菌有潛能存在，被滅菌物體的溫度比蒸汽的低，蒸汽在其表面凝結成水，放出潛能，可迅速提高被滅菌物體的溫度。又由于水和水蒸汽比空氣的熱容量大、導熱快、穿透力強，所以，與干熱滅菌相比，滅菌需要的溫度低、時間短。由于高壓蒸汽滅菌法水蒸汽的溫度隨其所受壓力的增加而升高，因而滅菌用的高溫蒸汽都是通過加壓獲得的。
手提式高壓滅菌鍋操作中常見的錯誤有：
（1）排氣不徹/底。在升壓前應將鍋內冷空氣排凈，因空氣是熱不良導體，若不排凈，冷空氣就會聚集井滯留在滅菌鍋中消毒筒的中下部，圍繞在待滅菌物的周圍。在這種情況下，假若鍋內僅排除一半空氣，當壓力表指針達到105Pa時，鍋內實際溫度僅能達到112℃，比要求的121℃低9℃之多，將導致滅菌不徹/底，可能造成大面積染菌。（自動的高壓滅菌鍋上下排氣閥都要打開然后加熱排空氣）
（2）排氣軟管沒有按要求插入滅菌筒的下部，或排氣軟管斷裂、缺失。滅菌鍋內的冷空氣是通過排氣軟管排出的，上述情況將造成滅菌筒外的蒸汽直接經排氣閥排出鍋外，滅菌鍋內的空氣排放受阻。
（3）消毒筒內物品堆積太緊、太滿，阻礙蒸汽的流通和熱交換，使容器內升溫減慢，造成物體內部殺菌不完/全。
（4）升溫過快。滅菌的時間是以達到要求溫度后的持續時間計算的，但溫度的升降過程同樣起到殺菌的作用，升降溫度過快會通過影響總的積溫而影響滅菌效果。另外，升溫過快，特別是使用外源蒸汽的情況下，會造成被滅菌物體內部升溫滯后于壓力表指示溫度。
（5）滅菌的物體體積（容量）過大。組織培養中或常規微生物實驗中，高溫蒸汽滅菌通常要在121℃（即蒸汽壓力為1kg／c㎡或5磅／寸2，或0.105MPa）下保溫15min。這一規定僅適用于試管、三角瓶中小于200ml容量的。若體積太大，特別是固體培養基，會造成滅菌不徹/底，應適當延長滅菌時間。
（6）任意延長滅菌時間。規定的滅菌溫度和時間是經過科學試驗確定的，只要按照正確的滅菌程序是能達到滅菌目的的。但在實踐中常有人為了“保證徹/底滅菌"而任意延長滅菌時間。這樣忽視了殺菌過程中溫度對培養基成分的破壞作用，是得不償失的。
（7）溫度不穩定。滅菌過程中溫度（壓力）忽高忽低，特別是手提式電能滅菌鍋，它沒有控溫裝置，難于控溫。操作者可配置調壓變壓器，通過調節電壓控溫。此外，還常遇到滅菌鍋內加水太少（應加2～3L）；容器內裝的溶液量過多（應少于2／3）；安全閥失靈等問題。
2、干熱滅菌
干熱滅菌指在烘箱160℃溫度下，維持2h，消除物體上的微生物的方法。常見錯誤有：
（1）將滅菌物品（如培養皿）堆摞放置，且堆得過滿、過擠，阻礙空氣流通和熱量的傳遞、交換；
（2）升溫時不打開箱頂通風孔，影響箱內冷空氣及水汽的排除；
（3）高溫（80℃以上）下開箱取物，熱蒸汽噴出造成燒傷及突然降溫，使玻璃器皿破裂；
（4）溫度過高（180℃以上）造成包裝紙、棉塞焦化，失去防菌或過濾作用；
（5）將不耐熱的槍頭、離心管、試管帽、濾器等塑料制品放入烤箱內滅菌，而致熔化。
3、灼燒滅菌
即直接利用火焰將微生物灼燒致死。特點：簡便、迅速、徹/底。主要用于接種工具及器皿的滅菌。如接種杯、鑷子、剪刀、玻棒、瓶口及其封口用的鋁箔的滅菌常見的錯誤有：
（1）接種工具的滅菌范圍不夠，如長度不夠，灼燒時沒有旋轉造成內外側滅菌不勻；
（2）接種工具沒有降至常溫即用于接種；
（3）對玻璃器皿灼燒過度，使棉塞、封口膜焦化或熔化。
