用Trizol法沉淀RNA容易有一些雜質(zhì)的。部分色素是會(huì)和RNA一起沉下來(lái)。這種情況可以用75%冷的乙醇多洗幾遍。對(duì)后續(xù)qRT-PCR多數(shù)情況下沒(méi)什么影響。
另外可以用硅膠柱法純化RNA，色素殘留會(huì)少一些。
RNase污染的來(lái)源
1：手指頭 – 手指頭是外源酶的第一來(lái)源，所以必需戴手套并且頻繁更換。另外，口罩也必需戴，因?yàn)楹粑彩且粋€(gè)重要的酶來(lái)源。戴手套口罩的另外的好處是保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員。
2：槍頭，離心管，移液器 單純的滅菌是不能滅活RNase的，所以槍頭和離心管要用DEPC處理，即使是標(biāo)明為DEPC處理過(guò)的。移液器最好是專(zhuān)用的，用前用75%的酒精棉球搽拭干凈，尤其是桿子；另外，一定不要使用褪頭器。
3：水/緩沖液 一定要確保無(wú)RNase污染。
4：實(shí)驗(yàn)臺(tái)面最起碼要用 75% 的酒精棉球搽拭干凈。
5：內(nèi)源 Rnase 所有組織均含內(nèi)源酶，故組織用液氮速凍是降低降解的最好辦法。液氮保存/碾磨方法的確不方便，但對(duì)有一些內(nèi)源酶含量很高的組織，卻是唯1的辦法。
6：RNA 樣品 RNA抽提產(chǎn)物可能都會(huì)含痕量的RNase污染。
7：質(zhì)粒抽提 質(zhì)粒抽提往往用到RNase降解RNA，殘留的RNase要用 Proteinase K 消化，PCI 抽提。
8：RNA 保存 即使低溫保存，痕量的RNase亦會(huì)導(dǎo)致RNA降解。長(zhǎng)期保存RNA的最好辦法是鹽/醇懸液，因?yàn)榇荚诘蜏貢r(shí)抑制所有的酶活性。
9：陽(yáng)離子 (Ca, Mg) 在含這些離子時(shí)，80℃加熱5分鐘會(huì)導(dǎo)致RNA被剪切，故如果RNA需要被加熱，保存液需要含螯合劑(1mM Sodium Citrate, pH 6.4)。
10：后續(xù)實(shí)驗(yàn)所用的酶 酶均有可能被Rnase污染。
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