構建穩定轉染的細胞株常見方法介紹
點擊次數：144 更新時間：2025-02-14
構建穩定轉染的細胞株是在目標細胞中引入外源基因，并確保其在細胞中的穩定表達。這可以通過多種方法實現，以下是常用的幾種方法：
1、質粒轉染法：
電穿孔法：使用電場使質粒DNA進入目標細胞，電穿孔法通常適用于多種細胞類型。
化學法：利用化學物質(如聚乙烯亞胺或其他聚合物)和質粒DNA形成復合物，通過復合物進入細胞。
2、病毒載體法：
腺病毒：將目標基因插入腺病毒載體，通過感染目標細胞實現基因轉移。
逆轉錄病毒（例如lentivirus）：通過逆轉錄過程將目標基因導入宿主細胞基因組。
3、電轉染法：
利用電場將目標基因引入細胞中，這通常需要專門設計的電極和設備。
4、納米粒子轉染法：
利用納米粒子(如金屬或聚合物納米粒子)與DNA形成復合物，通過內吞作用將復合物引入目標細胞。
5、RNAi法（siRNA或shRNA）：
利用小干擾RNA(siRNA)或短發夾RNA(shRNA)來沉默或抑制目標基因的表達，從而間接實現基因轉染。
6、CRISPR-Cas9系統：
使用CRISPR-Cas9系統來直接編輯細胞基因組，實現目標基因的插入或替代。
在進行細胞株構建時，需要注意以下事項：
選擇適當的轉染方法：不同的細胞類型對不同的轉染方法可能有不同的反應。要選擇適用于目標細胞的方法。
引入選擇標記：要確保引入的外源基因帶有適當的選擇標記(如抗生素抗性基因)，以便篩選和維持轉染細胞。
優化轉染條件：針對具體的細胞類型和轉染方法，需要優化轉染條件，包括濃度、時間和轉染試劑的選擇。
篩選穩定細胞株：一旦完成轉染，需要通過適當的方法篩選和鑒定穩定表達目標基因的細胞克隆，以確保細胞株的穩定性和一致性。
在進行這些實驗之前，建議仔細閱讀相關文獻、優化實驗條件，并進行必要的質控步驟，以確保獲得高質量的穩定轉染細胞株。
