ELISA試劑盒相應(yīng)的抗體結(jié)合
酶免疫測定(enzymeimmunoassay)可分為均相(homogenous)和非均相(heterogenous)兩種類型。在均相EIA中可 不需進行游離的和結(jié)合的標記物的分離而直接測定標記物。遠慕生物簡述：ELISA試劑盒例如在某種條件下，抗原抗體反應(yīng)后形成的酶標記抗原抗體復(fù)合物中的 酶失去其對底物作用的活力，因而測出的酶活力直接反映游離的酶標記物。
均相EIA在臨床檢驗中較少應(yīng)用。非均相EIA需先進行游離的和結(jié)合的標記物的分離。如前所述，固相載體可用作一種分離手段。這種固相酶免疫測定方法在 1971年zui初建立時稱為酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzymelinkedimmunosorbentassay)，簡稱ELISA，在國內(nèi)有譯作酶聯(lián)免疫 吸附試驗的，雖然含義不*確切，但已習(xí)用。如上所述，免疫測定是一種很敏感的測定方法，抗原抗體反應(yīng)后直接測定形成的沉淀或濁度，敏感度可達 5~10μg/ml，但在臨床檢驗中，某些待測物在標本中的含量遠低于這一水平，因此要尋找增加敏感度的方法。
標記的免疫測定是將檢測試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質(zhì)加以標記，通過測定標記物來提高敏感度。在放射免疫測定和酶免疫測定中，標記物分別為放射性 核素和酶，zui后用測定放射性和酶活力來計算待檢物的量，敏感度可比直接測定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。但是這種特異性也不是的。假使兩種化合物有著部分 相同的結(jié)構(gòu)，ELISA試劑盒在抗原抗體反應(yīng)中可出現(xiàn)交叉反應(yīng)。例如：絨毛膜促性腺激素(hCG)和黃體生成激素(LH)均由α和β兩個亞單位組成，其結(jié) 構(gòu)的不同處在β亞單位，而兩者的α亞單位是同類的。用hCG免疫動物所得的抗血清中含有抗α-hCG和抗β-hCG兩種抗體，抗α-hCG抗體將與LH中 的
α酶位發(fā)生交叉反應(yīng)。在臨床檢驗中，如用抗hCG抗血清作為妊娠診斷試劑檢定尿液中hCG，只能用于hCG濃度較高的試驗，否則婦女生理性排泄入尿液中的 微量LH將與之發(fā)生交叉反應(yīng)。因此在作為早孕診斷(敏感度應(yīng)達到50mIu/mlhCG)的實際中必須應(yīng)用只對hCG特異的抗β-hCG，以避免與其它激 素的交叉反應(yīng)的發(fā)生。
1.3.4敏感性
在測定血清中某一物質(zhì)的含量時，化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平，酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5~10μg/ml，免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感 度與酶反應(yīng)法相仿。標記的免疫測定的敏感度可提高數(shù)千倍，達ng/ml水平。例如，用放射免疫測定法或酶免疫測定法測定HBsAg，其敏感度可達 0.1ng/ml。
1.4免疫測定在臨床檢驗中的應(yīng)用
由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測標本中相應(yīng)的抗原，ELISA試劑盒因此免疫測定的應(yīng)用范圍極廣，在臨床檢驗中可用于測定：
1)體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。
2)激素，包括小分子量的甾體激素等。
3)抗生素和藥物。
4)病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。
5)另外，也可利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等。
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