大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 -2(ACE-2)ELISA 試劑盒
( 用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi) )
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA 法。用抗大鼠 ACE-2 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 ACE-2 與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗大鼠 ACE-2 ，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的 Streptavidin 與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，zui后加終止液硫酸，在 450nm 處測(cè) OD 值， ACE-2 濃度與 OD 值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)求出標(biāo)本中 ACE-2 濃度。
試劑盒組成 （ 2-8℃ 保存）
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1.收集標(biāo)本：血清、血漿（ EDTA 、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)， 2-8 ℃ 保存 48 小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（ -20 ℃ 或 -70 ℃ ）保存，避免反復(fù)凍融。
2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入 1ml 蒸餾水 混勻，配成 250ng/ml 的溶液 。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管 8 管，*管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul 。在*管中加入 250ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥牡谄吖苤形?/span> 500ul 棄去。第八管為空白對(duì)照。
3.10 ×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1:10 倍稀釋?zhuān)?/span> 示例： 1ml 濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）。
4.洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋?zhuān)ㄊ纠?/span> 1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）
檢測(cè)程序
1.加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。
3.每孔中加入*抗體工作液 100ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 60 分鐘。
4.洗板：同前。
5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液 100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 30 分鐘。
6.洗板：同前。
7.每孔加入底物工作液 100ul ，置 37 ℃ 暗處反應(yīng) 15 分鐘。
8.每孔加入 100ul 終止液混勻。
9.30 分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0nm 處測(cè) 吸光值。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1.所有 OD 值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。
2.以標(biāo)準(zhǔn)品 25 、 12.5 、 6.25 、 3.12 、 1.56 、 0.78 、 0.39 、 0 ng/ml 為橫坐標(biāo)， OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
3.根據(jù)樣品 OD 值在該曲線(xiàn)圖上查出相應(yīng) ACE-2 含量 即可 。
試劑盒性能
1. 靈敏度 ： zui小的 ACE-2 檢測(cè)濃度小于 0.2ng/ml 。
2.特異性： 可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的大鼠 ACE-2 。 不與 大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3.重復(fù)性：板內(nèi)、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于10 ％。
注意事項(xiàng)
1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
2. 洗滌過(guò)程 很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及 OD 值錯(cuò)誤地升高。
3. 板條開(kāi)封后剩余板條要再封好，保持 板條干燥 。
4. 本試劑盒宜置 4o C 冰箱保存。
5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！
