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  • 上海遠慕生物科技有限公司

    細胞有了支原體怎么辦? @遠慕新聞
    點擊次數:797 更新時間:2020-04-20

        平均有約15~35%細胞實驗室發生支原體污染(65~80%嚴重污染),超過一半實驗室有兩種支原體污染;而各地的細胞庫中,也有發現5~35%不等的支原體感染率,日本甚至高達60%。

        但!目前有在做常規支原體監控的細胞實驗室卻不到50%!

        支原體為細菌的一類,zui早在1898年由法國 E. Nocard 及 E.R.Roux 從肺疫牛隻中分離出來,1956年才正式命名為支原體 (Mycoplasma);支原體大小介于細菌與病毒之間 (直徑介于0.15-0.3?m),為目前發現zui小zui簡單的原核微生物,唯1可見的胞器是核糖體,沒有細胞壁,只有三層結構的細胞膜,所以呈高度多形性,有球形、桿形、絲狀,分枝狀等多種態 。

        大多支原體基因組只有0.58-1.38百萬堿基,這使得它的生物合成能力薄弱,必須利用本身細胞膜表面高密度的黏附素附著于宿主細胞表面,并交換宿主的細胞質及細胞膜成分,來獲取增殖需要的物質。但由于支原體生長條件復雜,使得菌體培養困難重重,導致過去支原體一直不受關注;近幾年,拜分子生物學與基因組學的進步所賜,基因構造簡單的支原體已引起了較為廣大注意。

     


        至今,共有超過180種支原體被發現,有超過20種能感染體外培養的細胞,而目前實驗室zui常見(95% 以上)的支原體則來自其中6種:

        源自于實驗人員鼻腔、口腔,并經由飛沫傳至培養細胞中的口腔支原體(M.orale)、豬鼻支原體(M.fermentans)及人型支原體(M.hominis),居于*(占總體的50%以上)。

        其次則為大多來自牛血清的精氨酸支原體(M. Arginini)、萊氏無膽甾支原體(A. Laidlawii)、及來自豬源胰酶的豬鼻支原體(M. Hyorhinis)。

        PS:BI胰酶經過輻照,不含活的支原體。

        既然支原體是細菌的一種,抗生素一加不就好了嗎?

        為什么可以搞到這么多細胞庫污染?

        支原體體積非常小, 極易通過0.22um濾膜, 且一般光學顯微鏡無法觀察到。

        支原體能附著并存活在器物表面(操作臺, 培養箱,顯微鏡等), 提高操作污染概率。

        支原體生長緩慢,通常不破壞宿主細胞但默默改變了細胞生長代謝,且對傳統抗生素具抗性,因為抗生素大多破壞細菌細胞壁, 而支原體恰恰沒有細胞壁。

        支原體污染初期, 培養基不變色, 細胞形態正常,但等大量污染時, 為時已晚, 耗時又耗力。

        你說,支原體煩不煩!

        目前檢測方法可大致分成四種:

        ■微生物培養法

        將樣品培養在特殊瓊脂培養基上,在37?C有氧環境中孵育2周,陽性培養基上會長出100~400um大小的“煎蛋狀”菌落。

        ■DNA螢光染色法

        支原體DNA中A-T含量占多數(55~80%),容易被Hoechst 33258此熒光劑染上,被支原體污染之細胞經染色后,在細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一之螢光小點。

        ■ELISA法

        將支原體16S核糖體RNA標上標簽,然后用特定抗體預包被過的微孔板對標簽進行捕獲,再加入顯色用的抗體及底物,zui后通過比色法得出檢測結果。

        ■PCR法

        原理為擴增支原體16S核糖體RNA的基因,能檢測多達19種支原體,操作快速、準確性高,市面上有多款相關產品可參考

        消滅支原體依不同處理發法,分成四大類:

        ■物理法:高溫高壓滅菌

        ■免疫法:使用支原體特異性抗血清、裸鼠傳代法

        ■化學法:界面活性劑處理(BI:Pharmacidal 支原體噴壺)

        ■生化法:使用抗生素等藥物(BI:BIOMYC 支原體處理試劑)

        目前,大環內酯(Macrolides)、四環素(Tetracyclines)和喹諾酮(Quinolones)這三類抗生素,是*對抗支原體效果*的藥物,而市面上有許多針對不同菌株配置的抗生素產品可以參考。

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