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    全血細(xì)胞培養(yǎng)染色體技術(shù)常用試劑配制
    點(diǎn)擊次數(shù):726 更新時(shí)間:2020-07-07

    一、國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用試劑配制
    (一)培養(yǎng)液
    (1)RPMI1640培養(yǎng)液:稱(chēng)取RPMI培養(yǎng)基9.8g,碳酸氫鈉1.9g、青霉素100u/ml,加雙蒸水至1000ml,調(diào)節(jié) pH7.2~7.4無(wú)菌過(guò)濾凍存?zhèn)溆谩?br />(2)小牛血清商品:成都生物制品廠(chǎng)。
    (3)植物凝集素(PHA):自制或成品(重慶藥檢所)。
    (4)pH調(diào)整液:5% NaHCO3溶液高壓滅菌(8磅15min),0.1N稀鹽酸液100ml。
    (5)秋水仙素:10mg/ml無(wú)菌過(guò)濾高壓滅菌(8磅10min)。
    (6)磷酸緩沖液:pH7.4。
    磷酸氫二鈉28.8g(H2O)、磷酸-二氫鉀2.67g(無(wú)水),溶于1000ml雙蒸水中,加肝素,終濃度為100u/ml。

    (7)Giemsa染色液:
    Giemsa粉劑 1g
    甘油 66ml
    在研缽中,加入少量甘油油仔細(xì)研磨然后放甘油全部加磨,60℃溫箱中保溫2h,冷卻后加入甲醇66ml。裝入有色瓶中混合待用。染色時(shí)用pH7.4磷酸緩沖液稀釋10倍,隨配隨用。

     

    (二)固定液
    (1)甲酸:冰乙酸3:1混合即用。
    (2)PBS緩沖液配制:
    NaCl 16g Na2HPO4(12H2O) 5.65g
    KCl 0.4g KH2PO4 0.4g
    加雙蒸水至1000ml pH7.0。
    取5%胰酶(生理鹽水配制)1ml加入50ml PBS液中(終濃度為0.025%),4℃冰箱待用。

    二、細(xì)胞培養(yǎng)(Bhatl B和McGee JOD,1990)
    1.*培養(yǎng)基
    RPMI 76.0ml
    胎牛血清 20.0ml
    植物凝集素 2.0ml
    抗生素/抗菌素溶液(100)

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