甘油菌種復(fù)蘇與保藏具體步驟
點擊次數(shù)：406 更新時間：2025-02-21
菌種保藏（culture preservation，culture collection）是保持微生物菌株活力和遺傳性狀的關(guān)鍵技術(shù)。在分子生物學研究中，經(jīng)過基因編輯或改造的菌種通常非常珍貴且微量，因此需要進行妥善的保藏。以下是具體的操作步驟：
菌種保藏
將待保存的菌液與配好的甘油混合液按1:1比例混合，最終達到20%甘油濃度。配置40%（v/v）甘油滅菌水混合液。
取2ml離心管或保菌管，加入500微升40%甘油-水混合液。
用移液槍吸取500微升菌液，將槍頭深入液面以下緩緩加入。
將離心管或保菌管放入-80℃冰箱保存。
在保菌管上標明日期、菌種、抗性等詳細信息，以便日后識別。
菌液復(fù)蘇
復(fù)蘇保存的菌液可以進行后續(xù)操作。主要步驟如下：
取含有抗性的LB培養(yǎng)基，每個培養(yǎng)管裝入約八毫升。所有操作均在無菌操作臺進行，以防污染。
向每管加入100微升菌液，37℃、180rpm搖12小時。
氨芐抗性配置：1g氨芐青mei素鈉溶解于10ml滅菌水中，過濾后-20℃保存。
LB培養(yǎng)基配置：10g氯化鈉、10g胰蛋白胨、5g酵母提取物溶于一升體系中，分裝到250ml錐形瓶，每瓶100ml。Amp抗性：100ml培養(yǎng)基加入100微升氨芐抗性。
通過這些簡單的步驟，你可以有效地保藏和復(fù)蘇珍貴的菌種，為后續(xù)的分子生物學研究提供堅實的基礎(chǔ)。
