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    中文名：人血管活性腸肽（VIP）ELISA試劑盒

    別名：人血管活性腸肽（VIP）ELISA Kit

    供貨商：上海遠(yuǎn)慕

    產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T

    檢測(cè)限：1.0 nmol/L

    標(biāo)記物：HRP

    檢測(cè)方法：雙抗體夾心法測(cè)抗原、雙抗原夾心法測(cè)抗體、間接法測(cè)抗體、競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體、競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原、捕獲包被法測(cè)抗體、ABS-ELISA法。

    預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。

    ELISA試劑盒包含以下各組分：

    （1）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；

    （2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

    （3）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；

    （4）酶的底物；

    （5）陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品（定性測(cè)定中），ELISA試劑盒參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）；

    （6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

    標(biāo)本的采集與保存：

    1.血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

    2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    3.組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS （0.01mol/L, pH=7.2-7.4）沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織不對(duì)應(yīng)體積的 PBS（一般按 1:9 的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對(duì)應(yīng) 9mL 的 PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記彔。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玱璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于 5000×g 離心 5~10 分鐘，取上清檢測(cè)。

    4.細(xì)胞培養(yǎng)上清或其他生物標(biāo)本：

    請(qǐng) 1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    自備物品

    1、 酶標(biāo)儀（建議儀器使用前提前預(yù)熱）

    2、 微量加液器及吸頭，EP管

    3、 蒸餾水或去離子水，濾紙

    操作步驟：

    實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37℃溶解；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

    1、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50?l，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40?l，然后再加待測(cè)樣品10?l（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

    2、溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

    3、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

    4、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

    5、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50?l，空白孔除外。

    6、顯色：每孔先加入顯色劑A50?l，再加入顯色劑B50?l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘。

    7、終止：每孔加終止液50ml，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

    8、測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

    結(jié)果判斷與分析

    1、 儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

    2、 以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的LTB4標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的LTB4含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

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