上海遠慕生物科技有限公司

    上海遠慕為您提供人核因子κB受體活化因子配基（RANKL）ELISA試劑盒，我司是經銷生物科學領域的供貨商，自公司成立以來，企業規模迅速發展中，生產加工和銷售的產品包括各種化學試劑、培養基、各種ELISA試劑盒、標準品等5萬余種類。在業內有*好評，咨詢！

    產品名稱：人核因子κB受體活化因子配基（RANKL）ELISA試劑盒

    別名：人核因子κB受體活化因子配基（RANKL）ELISA Kit

    供貨商：上海遠慕

    產品規格：96T/48T

    經營種類：進口分裝和原裝、國產。

    預期應用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中的含量。

    待檢樣本：體液、血清、血漿、細胞培養上清液、尿液、組織勻漿等

    特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的，且與其他相關蛋白無交叉反應

    檢測種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測試劑盒等種屬。

    檢測的原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

    ELISA試劑盒包含以下各組分：

    （1）結合物及標本的稀釋液；

    （2）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

    （3）酶標記的抗原或抗體（結合物）；

    （4）酶的底物；

    （5）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），ELISA試劑盒參考標準品和控制血清（定量測定中）；

    （6）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

    人核因子κB受體活化因子配基（RANKL）ELISA試劑盒標本的處理：

    （1）細胞培養上清液

    根據需要用試劑盒中的標準稀釋液稀釋樣品，然后按照說明書所述方法檢測。推薦稀釋濃度是稀釋5倍。

    （2）腦脊液

    根據需要用試劑盒中的標準稀釋液稀釋樣品，然后按照說明書所述方法檢測。推薦稀釋濃度是5倍。

    （3）血漿

    ①用EDTA2K離心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分鐘，4℃，分離血漿樣品，然后儲存在零下80℃直到使用。

    ②用試劑盒中的標準稀釋液5倍稀釋血漿以避免血漿中的干擾物質影響檢測，按照說明書方法檢測。

    人核因子κB受體活化因子配基（RANKL）ELISA試劑盒操作步驟（具體操作以說明書為準）：

    實驗開始前，請提前配置好所有試劑，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

    1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。

    為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

    2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃，60分鐘。

    3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

    4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

    5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

    6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

    7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

    8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

    人核因子κB受體活化因子配基（RANKL）ELISA分析檢測試劑盒操作注意事項：

    1.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

    2.試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

    3.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

    4.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

    5.洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

    6.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

    7.加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

    8.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

    9.底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

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