上海遠慕生物科技有限公司

    上海遠慕為您提供人血管生長素（ANG）ELISA檢測試劑盒，我司是經銷生物科學領域的供貨商，自公司成立以來，企業規模迅速發展中，生產加工和銷售的產品包括各種化學試劑、培養基、各種ELISA試劑盒、標準品等5萬余種類。在業內有*好評，咨詢！

    產品中文名：人血管生長素（ANG）ELISA試劑盒

    別名：人血管生長素（ANG）ELISA kit

    供貨商：上海遠慕

    規格：96T/48T

    保存：2-8℃

    經營種類：進口分裝和原裝、國產。

    試劑盒成分：酶標板，試劑，標準品等。

    樣本：血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。

    預期應用：ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中的含量。

    應用領域：僅供科研使用，不得用于醫學診斷，使用前仔細閱讀本說明書。

    產品原理：血管生長素（angiogenin），單鏈結構的多肽，由人肺中得到的血管生長素由123個氨基酸組成，分子量近14000，35％的氨基酸與胰腺的RNase相似，在兔角膜中，50ng就能促進血管形成。它對于核糖核苷酸酶的某些傳統底物，如小麥胚芽RNA，PolyC等都沒有活性。然而人胎盤中RNase抑制劑能破壞血管生長素的活性。它不與肝素結合。

    特點：

    1. 安全、快速、重復性好；

    2. 特異性100%，靈敏度超過90%；

    3. 探針性能穩定，低溫保存一年以上；

    4. 熒光信號強，結果判定直觀可靠；

    5. 操作簡單，定位精準，無實驗污染。

    人血管生長素（ANG）ELISA試劑盒技術原理：

    （1）抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

    （2）結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

    （3）酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。

    （4）受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。

    （5）此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。

    （6）加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復性好。以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。

    樣本處理及要求：

    1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

    2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

    3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

    4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

    5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

    6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

    7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

    用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法：

    1. 包被：用0.05M PH9，碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml，在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。

    2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

    3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml，37℃孵育0.5～1小時，洗滌。

    4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

    5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

    6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

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